Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций


Скачать 57.71 Kb.
НазваниеТема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций
Дата публикации02.06.2013
Размер57.71 Kb.
ТипМетодические указания
vb.userdocs.ru > Культура > Методические указания

Стом. ф-т, 2006




ЗАНЯТИЕ 25



Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.
Цель: На основе знаний особенностей биологии вирусов обосновать способы их культивирования, индикации, идентификации и методы лабораторной диагностики, вызываемых ими заболеваний.
Знать:

  1. Особенности морфологии и физиологии вирусов.

  2. Модели для культивирования вирусов in vitro и соответствующие им методы индикации вирусов.

  3. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.


Уметь:

  1. Проводить овоскопию куриного эмбриона и его заражение на хорионаллантоисную оболочку (ХАО).

  2. Микроскопировать культуры интактных и зараженных культур клеток ткани и устанавливать ЦПД вируса.

  3. Учитывать и оценивать результаты цветной пробы для индикации вируса.


Контрольные вопросы:

  1. Структура вирусов; понятия «элементарные тельца», «внутриклеточные включения».

  2. Особенности репродукции вирусов и исход их взаимодействия с клеткой.

  3. Модели для культивирования вирусов и соответствующие им методы индикации вирусов.

  4. Идентификация вирусов.

  5. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций и их особенности.


Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

  1. Провести вирусологическое исследование содержимого везикул больного с подозрением на натуральную оспу:

    1. Промикроскопировать препарат из содержимого везикул, окрашенный по Морозову. Сделать заключение.

    2. Заразить куриный эмбрион содержимым везикул на ХАО закрытым способом (продолжение исследования на следующем занятии).

  2. Учесть и оценить результаты заражения культуры клеток ткани материалом от больных «А» и «В» с подозрением на заболевание вирусной этиологии.

  3. Учесть и оценить результаты цветной пробы (ЦП) на культуре клеток ткани, зараженной материалом от больных «С» и «Д» с подозрением на заболевание вирусной этиологии.

  4. Ознакомиться с питательными средами, солевыми растворами, растворами ферментов, используемыми для приготовления и культивирования культур клеток ткани in vitro: раствор трипсина, раствор Хенкса, среда 199, бычья сыворотка.


Методические указания к выполнению исследовательского задания:

  1. Проведите вирусологическое исследование содержимого везикул больного с подозрением на натуральную оспу, для чего:




    1. ^ Промикроскопируйте препарат из содержимого везикул, окрашенный по Морозову. Сделайте заключение.

Вирусы, имеющие очень малые размеры, можно увидеть только в электронном микроскопе. Но вирусы размером более 200 мкм можно увидеть в обычном микроскопе при специальных методах обработки. Наиболее распространенным методом является серебрение по Морозову. Выявляемые при этом вирусы называются элементарными тельцами. Они выглядят в виде темно-коричневых, почти черных частиц на светло-коричневом фоне.

К числу крупных вирусов относится вирус натуральной оспы, элементарные тельца которого были впервые описаны Пашеном (элементарные частицы Пашена). Их обнаружение в содержимом везикул имеет диагностическое значение.


    1. ^ Заразите куриный эмбрион содержимым везикул на ХАО закрытым способом.

Вирусы являются абсолютными внутриклеточными паразитами и поэтому могут размножаться только в живых клетках. К числу наиболее распространенных способов их культивирования относится заражение куриного эмбриона. Заражение проводят на ХАО, в амниотическую или аллантоисную полость, либо в желточный мешок или сам эмбрион.

Перед заражением на ХАО 10-12-суточные эмбрионы просмотрите в овоскопе. Простым карандашом на скорлупе отметьте локализацию воздушного мешка, а сбоку - область без сосудов. Отмеченные места смажьте 1% раствором спиртовой настойки йода, а затем – спиртом. Толстой иглой осторожно прокалите скорлупу со стороны воздушной полости и сбоку. Через отверстие сбоку на ХАО нанесите 0,1 мл исследуемого материала и залейте проколы расплавленным карболизированным парафином. Зараженные эмбрионы поместите в термостат при Т-35-37 на 48-72 ч (продолжение исследования на следующем занятии).


  1. Учтите и оцените результаты заражения культуры клеток ткани материалом от больных «А» и «В» с подозрением на заболевание вирусной этиологии.

Культуры клеток ткани наиболее часто используются для выделения вирусов из патологического материала и их последующего культивирования. Индикация вирусов осуществляется по тем изменениям, которые наблюдаются в клетках в результате репродукции в них вирусов. Это так называемое цитопатическое действие вируса (ЦПД). Поскольку тип ЦПД зависит от вида вируса, то это имеет диагностическое значение.

Различают следующие типы ЦПД вируса: деструкция, симласто- или синцитообразование и пролиферация. При сравнении клеточного монослоя, инфицированного вирусом, с незараженными клетками контроля отмечают изменения, которые характеризуют ЦПД вируса.


  1. ^ Учтите и оцените результаты цветной пробы (ЦП) на культуры клеток ткани, зараженной материалом от больных «С» и «Д» с подозрением на заболевание вирусной этиологии.

Основой цветной пробы, как метода индикации вируса, является нарушение метаболизма культуры клеток ткани в результате его репродукции. Рост клеток сопровождается накоплением кислых продуктов метаболизма, сдвигом рН в кислую сторону и изменением цвета индикатора фенолового красного с красного на желтый. Вирусы подавляют клеточный метаболизм и среда сохраняет первоначальный цвет. Критерием достоверности полученных результатов является контрольная незараженная культура клеток ткани.


  1. Ознакомьтесь с питательными средами, солевыми растворами, растворами ферментов, используемыми для приготовления и культивирования культур клеток ткани in vitro.

Культуры клеток ткани, используемые для культивирования вируса, получают чаще всего из эмбриональных или опухолевых тканей. Различают первичные, перевиваемые и полуперевиваемые типы культур клеток.

Приготовление первичных культур включает следующие этапы:

  • измельчение ткани на фрагменты и отмывание в растворе Хенкса от крови, клеточного детрита и др;

  • диспергирование клеток путем обработки 0,25% раствором трипсина;

  • отмывание раствором Хенкса полученной суспензии клеток и помещение ее в концентрации 200-400 тыс/мл в культуральные сосуды (пробирки, пенициллиновые флаконы и др.), куда вносится соответствующая питательная среда (199, 199 с добавлением бычьей сыворотки и др.);

  • термостатирование культуральных сосудов при 37 в течение 2-3 дней для формирования монослоя.

Состав солевых растворов и питательных сред, применяемых в вирусологии, обеспечивает сохранение, рост и размножение in vitro эукариотических клеток.

^ Раствор Хенкса: набор неорганических солей, глюкоза, феноловый красный (обеспечивает сохранение рН, осмотическое давление и состав необходимых неорганических веществ).

Среда 199: содержит более 60 компонентов, в том числе 20 аминокислот, 17 витаминов, составные части нуклеиновых кислот, глюкозу, 8 минеральных солей и др.

^ Бычья сыворотка: вводится в состав питательных сред в качестве дополнительного источника белкового питания, витаминов, факторов роста.
Вопросы для самоконтроля:

  1. Назовите отличительные особенности вирусов от бактерий.

  2. Обоснуйте выбор моделей для культивирования вирусов.

  3. Обоснуйте выбор методов заражения куриного эмбриона для выделения вирусов и способы их индикации.

  4. Назовите типы культур клеток ткани, используемых для культивирования вирусов; в чем их особенности.

  5. Назовите и обоснуйте способы индикации вирусов при заражении культур клеток тканей.

  6. Обоснуйте возможность использования вирусоскопического метода диагностики вирусных инфекций, в чем его особенность по сравнению с микроскопическим методом диагностики бактериальных инфекций?

  7. В чем суть вирусологического метода диагностики вирусных инфекций и какой метод в диагностике бактериальных инфекций является его аналогом?

  8. Назовите критерии оценки результатов при серологической диагностике вирусных инфекций.


Литература:

Учебники:

  1. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. – М.: ООО «МИА», 2002. – С. 68-91.

  2. Медицинская микробиология / Гл. ред. В. И. Покровский, О. К. Поздеев. – М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. – С. 659-687.

  3. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 89-97, 272-277.


Лекции по микробиологии.
Тесты программированного контроля, 2004 г.



Похожие:

Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconТема: Лабораторная диагностика парентеральных вирусных гепатитов В, С, D
Цель: на основе знаний особенностей биологии вирусов гепатитов В, С, D, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать...
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconМетодическая разработка для преподавателей практическое занятие №1...
Цель: способствовать формированию у студентов умений по изучению микробиологии стафилококковых и стрептококковых инфекций, по освоению...
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconТема: Лабораторная диагностика гриппа
Цель: на основе знаний биологии вирусов гриппа, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику лабораторной...
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconВирусные болезни крайне разнообразны, что определяется прежде всего...
Рассмотрим общий патогенез вирусных инфекций. Взаимодействия вируса и клетки проходит в 2 этапа
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconТема: Лабораторная диагностика полиомиелита и заболеваний, вызываемых...
Цель: на основе знаний особенностей биологии вирусов полиомиелита, Коксаки, есно, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом...
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconМетодическая разработка для преподавателей практического занятия...
Цель: способствовать формированию у студентов умений по изучению вирусных инфекций: грипп, парагрипп, орви, паротит, корь
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconКалендарно-тематический план лабораторно-практических занятий (4 часовых) лечебный факультет
Патологическая анатомия: содержание, задачи, объекты и методы исследования. Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток...
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconМетодичка для студентов тема
Тема: Обмен жидкостей в организме. Отеки. Обмен натрия. Гипо- и гипернатриемия. Методы диагностики водно-электролитного баланса
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconТема: Микробиологическая диагностика сифилиса
Цель: На основе знаний биологии возбудителей сифилиса, хламидийных и микоплазменных инфекций, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом...
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций iconЛекция №8 Тема: Хронический бронхит
Тема: Хронический бронхит. Этиология. Классификация. Клинические симптомы, механизм их развития. Методы диагностики
Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2014
контакты
vb.userdocs.ru
Главная страница